傅立葉變換紅外光譜法在組織成像分析中正面臨僵局

紅外光譜法用于生物組織研究已有一段時間。它可以在不使用染色劑的情況下，深入了解植物、動物和人類組織的生物化學成分。最令人興奮的一大發(fā)現(xiàn)是，它能夠根據(jù)紅外光譜數(shù)據(jù)，區(qū)分病變組織和健康組織。但到目前為止，紅外顯微技術(shù)僅限用于研究。" 其原因在于必須投入大量的時間來進行光譜采集。盡管焦平面成像探測器有助于大幅縮短時間，但這項技術(shù)仍然非常耗時。

新成員加入: 激光紅外成像 (QCL)

現(xiàn)在，激光紅外成像等全新工具有望打破這一僵局。與傳統(tǒng)的中紅外光源相比，紅外激光器能夠提供更高的功率密度。因此，可以在較短的時間內(nèi)采集到較好的紅外光譜數(shù)據(jù)。隨著激光紅外成像技術(shù)和HYPERIONI的到來，終于迎來了轉(zhuǎn)機。由于紅外激光具有較高的能量密度，可以在很短的時間內(nèi)收集到高信噪比的光譜數(shù)據(jù)。其速度優(yōu)勢顯著，提升了幾個數(shù)量級。本應用說明詳細介紹了這項技術(shù)的應用。

有關(guān)激光紅外成像，用戶所必須了解的知識

激光紅外成像支持中紅外指紋區(qū)(1800-950cm1)內(nèi)的多種圖像采集模式。紅外光譜實時成像實現(xiàn)了以視頻頓速率進行的實時化學成像，旨在找到感興趣區(qū)或跟蹤反應離散波數(shù)成像聚焦于特定的波數(shù)，而不是全光譜，這可以大大加快采集過程。連續(xù)掃描，先選擇光譜范圍，然后通過激光的連續(xù)掃描生成譜圖。所得譜圖與FT-IR相當。2離散掃描通過逐步調(diào)諧激光頻率，來記錄所選的光譜范圍，從而獲得更高的波數(shù)精度，但采集時間

與激光紅外成像之對比: 組織樣品

下面對比了速度最快的FT-IR成像顯微鏡(LUMOSI)與HYPERIONI激光紅外成像顯微鏡對分析組織樣品的情況。

帶 MCT 探測器的 HYPERION II 顯微鏡

使用HYPERIONII紅外激光成像比使用LUMOSIIFPAFTR測量速度快14倍以上。雖然使用紅外激光(QCL)僅可采集MIR 指紋區(qū)，但這對于HYPERIONI來說不是問題，因為它還配有FTHIR顯微鏡，可以根據(jù)需要掃描整個光譜范圍。圖1顯示了成像技術(shù)取得的另一個里程硅式進展。使用OPUS軟件的自適應K-means聚類算法，可根據(jù)原始數(shù)據(jù)自動生成紅外化學圖像。它根據(jù)光譜變化自動分析成分分布并評估IR圖像，速度極快。即使是較大的樣品，如光譜張數(shù)超300萬的扁桃體組織切片(圖1所示)，也僅需不到20分鐘即可完成分析，包括光譜數(shù)據(jù)評估。

圖1：利用自適應 K-means 聚類算法自動評估化學成像。根據(jù)360萬光譜的差異進行組分分布分析。

變革:空間相干性抑制技術(shù)

圖2顯示了布魯克已獲得空間相干性抑制技術(shù)在采集激光紅外圖像時起到的改善作用。在左側(cè)的圖a和圖c中，可以看到激光束的干涉條紋對成像結(jié)果的影響。圖像看起來很模糊，有條紋和斑點。右側(cè)的圖b和圖d中相干性抑制技術(shù)在光源處消除了空間相干現(xiàn)象，從而采集到無比清晰的圖像(未經(jīng)任何后期處理)。

圖2：布魯克的空間相干性抑制技術(shù)改善了使用QCL成像技術(shù)采集的紅外成像的質(zhì)量: 我們得到了(d)原本的紅外成像圖，而不是(c)中干擾的傷偽影、條紋和斑點I2，該成像未經(jīng)任何后期處理。

單波長成像的優(yōu)勢

紅外激光成像與傅立葉紅外相結(jié)合，使得HYPERIONII能夠以驚人的速度，采集離散波數(shù)的詳細化學圖像。如果樣本成分已知，則用戶可以選擇只采集相關(guān)波數(shù)。

在所選的示例中，RGB圖像由三個波數(shù)創(chuàng)建而成，這使得總測量時間減少到一分鐘，進一步提高了速度優(yōu)勢--超過兩個量級。

結(jié)果:無比清晰的成像圖

激光紅外成像是生命科學研究特別是組織分析的重要工具。結(jié)合HYPERIONII的FTR功能，它們提供了一個全面解決方案，將生物組織成像推進到新的階段。

HYPERION II ILIM 和樣品倉（左）和焦點平面陣列成像探測器（右）